Minta kezelés

A minta előkészítése során az első lépés a szövetek vagy sejtek homogenizálása, hogy elősegítsük a biológiai molekulák (például DNS, RNS, fehérjék) kioldódását. Ezt követően az anyagot különböző kémiai és mechanikai módszerekkel tisztítjuk és koncentráljuk, hogy eltávolítsuk a szennyeződéseket, például lipideket vagy fehérjéket, amelyek zavarhatják az elemzést. A feldolgozás során a megfelelő stabilitás és integritás biztosítása érdekében hűtést alkalmazunk, valamint, ha szükséges, enzimes kezelést végzünk a minta előkészítése előtt.

A minta minősítése során különféle molekuláris biológiai módszerekkel ellenőrizzük a DNS és RNS molekulák integritását és tisztaságát. A DNS minőségét a hosszú láncú fragmentumok és az abszorbanciaváltozás alapján mérhetjük, míg az RNS minősítéshez gyakran használunk gél-elektroforézist, hogy megbizonyosodjunk a minta fragmentálódásának mértékéről. Mérjük a tisztaságot és a koncentrációt, hogy biztosítsuk az optimális kiinduló anyagot a downstream alkalmazásokhoz, mint például a PCR vagy a szekvenálás.

A könyvtár készítés során a kívánt biológiai mintából (például genom eredetű DNS-ből vagy transzkriptomából származó RNS-ből) specifikus fragmentumokat választunk ki, amelyeket adaptorokkal ligálunk, hogy lehetővé tegyük a szekvenálási folyamatot. A DNS/RNS fragmentumokat PCR vagy más amplifikációs módszerekkel szaporítjuk, biztosítva a kívánt mennyiséget és specifitást. A könyvtár minőségét és komplexitását kontrolláljuk, majd előkészítjük a szekvenálásra, hogy pontos és megbízható adatokat kapjunk az újgenerációs szekvenálás (NGS) segítségével.